資料紹介

ヒスチジン合成能を持たない宿主細胞に形質転換法の一つであるエレクトロポレーション法を用いてベクター遺伝子を導入し、最小培地によって酵母形質転換体の選抜をおこなう。

資料の原本内容 ( この資料を購入すると、テキストデータがみえます。 )

目的

　酵母細胞を用いた遺伝子組み換え技術と酵母の形質転換法の原理や技術について学び、習得すること。本実験では、ヒスチジン合成能を持たない宿主細胞に形質転換法の一つであるエレクトロポレーション法を用いてベクター遺伝子を導入し、その後最小培地によって酵母形質転換体の選抜を行う。
材料と方法
[材料]

宿主細胞・・・酵母 Pichia pastoris GS115 (Invitrogen)、ヒスチジン合成能を失わせた変異株

ベクターDNA・・・pPIC3.5 (Invitrogen)、ヒスチジン脱水素行素遺伝子をコードしている
[培地・試薬調製]
-YPD培地-
Yeast extract　　　　　　　 0.6131g

Peptone　　　　　　　　　　1.2000g

Dextrose (D-glucose)　　　 1.1995g
　まず、上記の試薬をフラスコに採り、蒸留水に溶解して60mLとし、それを3本の100mL容三角フラスコに20mLずつ分注した。シリコン栓をし、上をアルミ箔で被い、その後、121℃、15分間のオートクレーブを行った。
-選抜プレート培地 (アミノ酸を含ま...

コメント0件